Morphometry of bovine blastocysts produced in vitro in culture media with antioxidants cysteamine or oily extract of Lippia origanoides / [Morfometria de blastocistos bovinos produzidos in vitro em meio de cultura com antioxidantes cisteamina ou extrato oleoso de Lippia origanoides]

This study aimed to evaluate the ultrastructural morphometry of bovine embryos produced in vitro grown at different concentrations of antioxidants. After in vitro maturation and fertilization, the presumptive zygotes were assigned into five treatments. T1) without the addition of any antioxidants (negative control); T2) addition of 50µM/mL cysteamine; and T3, T4 and T5) adding 2.5µg/mL, 5.0µg/mL or 10.0µg/mL of the antioxidants derived from the oily extract from Lippia origanoides, respectively. On D7 of culture, the embryos in the blastocyst stage were fixed and prepared for electron transmission microscopy. These were evaluated for the proportion of cytoplasm-to-nucleus, cytoplasm-to-mitochondria, cytoplasm-to-vacuoles, cytoplasm-to-autophagic vacuoles and cytoplasm-to-lipid droplets. Blastocysts cultured in media containing oily extract of Lippia origanoides presented morphological characteristics such as high cell:mitochondria ratio and low cell:vacuoles and cell:autophagic vacuole ratio, possibly been morphological indicators of embryonic quality. Inner cell mass (ICM) from blastocysts cultured in media without any antioxidants had the highest cell:vacuole ratio. Similar results were found in the trophectoderm (TE) cells of blastocysts from treatment 2. Embryo culture media supplemented with antioxidants derived from Lippia origanoides oil produced embryos with a higher cytoplasmic proportion of organelles, such as mitochondria. Also, treatments without any antioxidants or with the addition of cysteamine presented cytoplasmic vacuolization, a characteristic related to production of poor-quality embryos.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a morfometria ultraestrutural de embriões bovinos produzidos in vitro e cultivados em diferentes concentrações de antioxidantes. Após a maturação e a fertilização in vitro, os possíveis zigotos foram divididos em cinco tratamentos: T1) sem adição de antioxidantes (controle negativo); T2) adição de 50µM/mL de cisteamina; e T3, T4 e T5) adição de 2,5µg/mL, 5,0µg/mL ou 10,0µg/mL dos antioxidantes derivados do extrato oleoso de Lippia origanoides, respectivamente. No D7 de cultivo, os embriões em estágio de blastocisto foram fixados e preparados para microscopia eletrônica de transmissão. Estes foram avaliados para a proporção entre citoplasma e núcleo, citoplasma e mitocôndria, citoplasma e vacúolos, citoplasma e vacúolos autofágicos e citoplasma e gotículas lipídicas. Blastocistos cultivados em meio contendo extrato oleoso de Lippia origanoides apresentaram características morfológicas como alta relação célula:mitocôndria e baixa relação célula:vacúolos e célula:vacúolo autofágico, possíveis indicadores morfológicos de qualidade embrionária. A massa celular interna (MCI) de blastocistos cultivados em meio sem quaisquer antioxidantes teve a maior razão célula:vacúolo. Resultados semelhantes foram encontrados nas células do trofectoderma (TE) de blastocistos do tratamento 2. Portanto, o meio de cultivo embrionário suplementado com antioxidantes derivados do óleo de Lippia origanoides produziu embriões com maior proporção citoplasmática de organelas, como mitocôndrias. Além disso, tratamentos sem antioxidantes ou com adição de cisteamina apresentaram vacuolização citoplasmática, característica relacionada à produção de embriões de baixa qualidade.(AU)

Ultrastructure of bovine placenta during all gestational period / Ultraestrutura de placenta bovina durante todo o período gestacional

Placentas from pregnant cows with different gestation periods were used. Placental fragments of all groups were processed and evaluated by transmission electron microscopy. After fragment analysis, bovine placenta was observed to be epitheliochorial type in early pregnancy, becoming progressively sinepiteliocorial at the beginning of the second trimester. There are no ultrastructural evidences of inflammation in the region of caruncles throughout gestation, despite the invasion of caruncle proper lamina by trophoblast cells. However, throughout pregnancy and especially at the end, there were evident signs of cell degeneration in both trophoblast and the uterine epithelium. The active trophoblast cells intensely phagocytize cellular debris. There are complex interdigitations between the surface of the trophoblast and the uterine epithelium, which is related to the increase of the exchange surface between mother and fetus. At the end of pregnancy, interdigitations disappear, favoring the detachment and expulsion of the placenta after birth.(AU)

Foram utilizadas placentas de vacas abatidas em frigorífico com diversos tempos gestacionais. Fragmentos de placentomo de todos os grupos foram processados e avaliados em microscopia eletrônica de transmissão. Após análise dos fragmentos, observou-se que a placenta bovina é do tipo epiteliocorial no início da gestação, tornando-se sinepiteliocorial progressivamente a partir do início do segundo mês de gestação. Não existem evidências ultraestruturais de inflamação na região das carúnculas durante toda a gestação, apesar da invasão da lâmina própria caruncular por células trofoblásticas. No entanto, durante toda a gestação e em especial ao seu final, foram observados sinais evidentes de degeneração celular, tanto do trofoblasto como do epitélio uterino. As células trofoblásticas ativas fagocitam intensamente os debris celulares originados dessas degenerações. Existem complexas interdigitações entre a superfície do trofoblasto e do epitélio uterino, o que estaria relacionado com o aumento da superfície de troca entre mãe e feto. Ao final da gestação, praticamente desaparecem essas interdigitações, favorecendo o descolamento e a expulsão da placenta após o parto.(AU)

Characterization of the virulence, growth temperature and antibiotic resistance of the Campylobacter jejuni IAL 2383 strain isolated from humans

The objective of this study was to characterize the C. jejuni IAL2383 strain isolated from humans in Brazil. Transcripts for the racR, dnaJ and ciaB genes were found and flaA, plda and cadF genes were present in the genome and bacteria was sensitive to most of the important antimicrobials used to treat humans. C. jejuni IAL2383 is a good experimental model to analyze the interactions with cells.

Avaliação computacional da compactação da cromatina e de características morfométricas da cabeça de espermatozoides de coelho (Oryctolagus cuniculus) / Computational evaluation of chromatin condensation and morphometric characteristics of rabbit (Oryctolagus cuniculus) sperm head

Investigou-se a correlação entre a morfometria da cabeça e a intensidade da condensação e heterogeneidade da cromatina em espermatozoides de coelho (Oryctolagus cuniculus). Para tal, utilizaram-se 35 esfregaços de sêmen de coelhos da raça Nova Zelândia, corados com azul de toluidina e avaliados por análise de imagem computacional. As imagens foram obtidas digitalmente em tons de cinza e avaliadas por algoritmos desenvolvidos em ambiente de programação Scilab. As mensurações obtidas da cabeça dos espermatozoides foram área, perímetro, comprimento, largura, relação comprimento largura, elipsidade, fator de forma, descritores Fourier e simetria lateral e anteroposterior. Também foram avaliadas a intensidade da compactação e a heterogeneidade da cromatina espermática. Os espermatozoides de coelho apresentaram compactação e heterogeneidade cromatínica mais intensas do que os de touro e observou-se correlação significativa entre características morfométricas da cabeça e compactação e heterogeneidade cromatínica. Conclui-se que a cromatina é importante para a constituição morfológica da cabeça de espermatozoides de coelho e que a cromatina espermática de coelho é naturalmente mais heterogênea e menos compactada que a de touro.

The correlation between the head morphometry and the intensity of condensation and heterogeneity of sperm chromatin were investigated in rabbit (Oryctolagus cuniculus). To this, 35 semen smears from New Zealand rabbits were stained with toluidine blue and evaluated by computer image analysis. The images were obtained in digital grayscale and analyzed by algorithms developed in the Scilab programming environment. The measurements obtained from the sperm heads were area, perimeter, length, width, length:width ratio, ellipticity, shape factor, lateral and anterior-posterior symmetries, and Fourier descriptors. The intensity and heterogeneity of the compaction of sperm chromatin was also evaluated. The rabbit spermatozoa showed chromatin heterogeneity and condensation more intense than the bull spermatozoa, and it was observed correlation between morphometric characteristics of the head and chromatin compaction and heterogeneity. The results suggest that chromatin is important for the morphological constitution of the head morphology spermatozoa head, as well as, rabbit sperm chromatin is inherently more heterogeneous and less condensed than the bull sperm chromatin.

Biological characterization of a myotoxin phosphoplipase A2 homologue purified from the venom of the snake Bothrops moojeni

A myotoxin phospholipase A2 homologue, BmooMtx, was isolated from the venom of Bothrops moojeni by a combination of ion-exchange chromatography on DEAE-Sephacel column and gel filtration on Sephadex G-75. SDS-PAGE showed the enzyme to be a monomer with a molecular weight of 16,500. BmooMtx induced release of creatine kinase and morphological analyses indicated that it provoked an intense myonecrosis, with visible leukocyte infiltrate and damaged muscle cells 24 hours after injection. Anti-BmooMTx antibodies partially neutralized the myotoxic activity of BmooMtx and crude B. moojeni venom, as judged by determination of plasma creatine kinase levels and histological evaluation of skeletal muscle in mice. Anti-BmooMTx antibodies were effective in reducing the plasma creatine kinase levels of crude B. alternatus and B. leucurus venoms, evidencing immunological cross-reactivity between BmooMTx and other bothropic venoms. Intraplantar (i.pl.) injection of BmooMtx (1 to 15 ìg/animal) caused a dose- and time-dependent hyperalgesia and edematogenic responses. Dexamethasone (0.4 mg/kg), meloxicam (2 mg/kg) and promethazine (5 mg/kg) markedly reduced the hyperalgesia. Our data suggest that these drugs may likely serve as complementary therapies in cases of accidents with Bothrops moojeni, provided that such pharmacological treatments are administered immediately after the incident.

Eletroacupuntura no reparo do tendão calcanear comum em coelhos após enxertia com peritônio bovino / Eletro-acupuncture in the rabbit acchiles tendon repair using bovine peritoneum graft

Avaliou-se o efeito da eletroacupuntura (EA) sobre os aspectos macroscópicos e microscópicos em 36 coelhos que tiveram o tendão calcanear comum seccionado e que, após 30 dias, receberam enxerto de peritônio bovino conservado em solução saturada de sal. Após a cirurgia, os animais foram distribuídos em três grupos de igual número: os do grupo E10 foram estimulados pela EA do segundo ao 11º dia de pós-operatório, os do grupo E20 do 11º ao 31º dia de pós-operatório e os do grupo C não foram estimulados. Posteriormente, os animais foram redistribuídos em três subgrupos de igual número, os quais foram observados no pós-operatório por 11, 31 e 91 dias. Nos coelhos do E10 e E20, ocorreu diminuição de aderência da área enxertada aos tecidos circunvizinhos. Aos 31 dias de pós-operatório, observou-se nos do E10 tecido conjuntivo. Verificou-se intensa neovascularização no local enxertado em todos os animais que receberam estímulo pela EA. Nos coelhos do E10, aos 91 dias, verificou-se intensa quantidade de tecido conjuntivo, com fibras colágenas organizadas e paralelas ao eixo do tendão. O estímulo pela EA na fase precoce do pós-operatório estimulou a maturação cicatricial com mínima reação inflamatória.

The effects of eletro-acupuncture (EA) were evaluated on clinical and histological aspects in 36 rabbits that had the acchiles tendon sectioned and grafted after 30 days using bovine peritoneum graft preserved in saturated salt solution. The animals were randomly distributed into three groups. They were stimulated by EA from the 2nd to the 11th post-operative day (S10 group), from the 11th to the 31st post-operative day (S20 group), and were not stimulated (C group). Then, the rabbits were distributed into three sub-groups and were observed for 11, 31, and 91 days. The rabbits from S10 and S20 groups presented decreased adhesions between graft and adjacent tissues. The rabbits from S10 group showed connective tissue at 31 days of the post-operative period. Intense graft neovascularization was observed in all animals stimulated by EA. Large amounts of connective tissue with organized and parallel to the tendon axis collagen fibers were detected on the day 91st in the S10 group animals. The early EA stimulation during the post-operative period stimulated the tendon healing with minimal inflammatory reaction.

Análise computacional da compactação da cromatina de espermatozoides de galo / Computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa

Testaram-se variantes metodológicas utilizando azul de toluidina (AT), até se estabelecer um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da cromatina em espermatozoides de galo. Para tal, foram utilizados sêmen de 10 galos com 35 semanas de idade e sêmen de 10 galos com 60 semanas de idade. O melhor método foi o de hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com AT 0,025 por cento, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool, diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente avaliadas por análise de imagem computacional, em que foram feitas mensurações da área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozoides de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina que os de galos jovens. Os galos jovens apresentaram cabeça dos espermatozoides maior que os galos mais velhos. A análise computacional da compactação da cromatina mostrou-se um método menos subjetivo e mais preciso que a avaliação visual das cabeças dos espermatozoides.

The methodological variants using toluidina blue (AT) to establish a trustworthy protocol for the computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa were studied. Twenty semen samples were used: ten from 35-week-old roosters and ten from 60-week-old roosters. Different methods of denaturation and staining were tested. The best method was hydrolysis with 1N HCl for 10 minutes, staining in bucket with 0.025 percent AT, pH 4.0, for 20 minutes, dehydration in alcohol, clearing in xylol, and mounted with Canada balsam. All the semen samples were submitted to this protocol and later evaluated by computational image analysis. Area, length, width, perimeter, and chromatin compaction homogeneity of head spermatozoa were measured. The sperm of older roosters presented more chromatin changes than the ones of younger ones. The spermatozoa of younger roosters presented bigger heads than the ones of older roosters. The computational analysis of chromatin compaction showed to be less subjective and more precise than the visual evaluation for identification of chromatin alterations of rooster spermatozoa.

Morfometria da mucosa duodenal em frangos de corte submetidos à temperatura ambiente cíclica elevada / Intestinal morphometry of the duodenal mucosa in broiler chickens underwent to high cyclic environment temperature

Os efeitos da temperatura ambiente cíclica elevada sobre a morfometria da mucosa duodenal e o peso corporal em frangos de corte foram avaliados. Setenta pintos de corte, machos, foram alojados em gaiolas e distribuídos em dois grupos. Um grupo foi submetido diariamente, durante uma hora, à temperatura ambiente cíclica elevada do primeiro até o 42º dia de idade (ambiente ST); e outro foi mantido em conforto térmico (ambiente TN). Cinco frangos de cada grupo foram sacrificados, semanalmente, por deslocamento cervical para mensuração da altura de vilosidades (VI), profundidade das criptas (CR) e relação vilo/cripta (VI/CR) duodenal. Dez aves de cada grupo foram pesadas semanalmente em balança digital. Utilizou-se delineamento inteiramente ao acaso em esquema fatorial 7x2 (sete idades: um, sete, 14, 21, 28, 35 e 42 dias, e dois ambientes: ST e TN). Os ambientes foram comparados pelo teste de Fisher (P<0,05), e, para avaliar o efeito da idade, foi realizada análise de regressão polinomial. As aves do ambiente ST apresentaram menores VI aos 14 e 21 dias, menor CR aos 28 dias e menor VI/CR aos 21 dias de idade do que as aves do ambiente TN. A temperatura ambiente cíclica elevada teve efeito danoso sobre a estrutura da mucosa duodenal de frangos de corte até a quarta semana de idade e sobre o peso corporal ao final do ciclo produtivo.

The effects of high cyclic environment temperature on body weight and morphometry of the duodenal mucosa in broiler chicken were evaluated. Seventy one-day-old male broiler chicks were sheltered in cages and distributed in two groups. One group was daily exposed to high cyclic environment temperature for an hour, from hatching to 42 days of age (group ST), the other one was kept under thermoneutral conditions (group TN). Five chickens of each group were weekly slaughtered by cervical delocation to mesure the villosities height (VI), crypts depth (CR), and villo/crypt ratio (VI/ CR) in the duodenum. Ten chickens of each group were weighted weekly on a digital balance. A completely randomized experimental design in a 7x2 factorial arrangement (hatching, seven, 14, 21, 28, 35, and 42 days of age and two environments: ST and TN). The environments were compared by Fisher test (P<0.05) and the effects of days of life by polynomial regression. The ST group had reduction in VI at 14 and 21 days of age (P<0.01), CR at 28 days of age (P<0.05), and in VI/CR at 21 days of age (P<0.01). Cyclic high environment temperature had harmful effect on intestinal structure of broiler from hatching to four weeks of age and on body weigh at the end of the productive cycle.

Blefaroplastia em coelhos por meio de cartilagem auricular alógena conservada em solução saturada de NaCl / Rabbits eyelid repair by means of alogen auricular cartilage preserved in NaCl saturated solution

Avaliou-se a reconstrução da pálpebra inferior de coelhos, com cartilagem auricular alógena, conservada em solução saturada de NaCl em 12 coelhos, adultos, de ambos os sexos. Os animais receberam acepromazina (0,5mg/kg/IM) e tiletamina e zolazepam (7,0mg/kg/IM), após o que removeu-se um fragmento de 1,0x0,5cm das pálpebras inferiores, esquerda e direita. A pálpebra esquerda foi reparada pela técnica de blefaroplastia em H (GC) e a direita por um retalho de cartilagem auricular associado a blefaroplastia em H (GE). Aos sete dias de pós-operatório (PO), as feridas cirúrgicas dos animais do GC apresentavam retração cutânea. Aos 15 dias de PO, observou-se que as feridas nos coelhos do GE estavam cicatrizadas, mas 30 por cento das do GC apresentavam deiscência e retração cicatricial. Aos 30 dias de PO, as feridas nos animais do GE e GC apresentavam-se cicatrizadas, mas, 30 por cento nos do GC não apresentavam as bordas das feridas coaptadas. O enxerto de cartilagem auricular diminuiu a retração cicatricial, possibilitando reparo anatômico à pálpebra

The rabbit inferior eyelid repair was evaluated using NaCl satured-stored alogenous auricular cartilage. Twelve adult male and female rabbits had a 1.0x0.5cm fragment removed from the left and right inferior eyelids after pre-medication with acepromazine (0.5mg/kgIM) and tiletamine-zolazepan (7.0mg/kgIM) anesthesia. The "H" plasty technique was used to the left eyelid repair (CG) and the right one was repaired with auricular cartilage associated with the "H" plasty technique (GG). The CG wounds presented cutaneous retraction at day 7th of the post-operative period. The GG wounds were healed on the day 15th, while the CG wounds presented 30 percent of deiscence and cicatricial retraction. The GG and CG wounds were healed at day 30th of the post-operative period, but 30 percent of the CG wounds did not present the edges lined up. It was concluded that the auricular cartilage graft decreases cicatricial retraction and improves anatomical eyelid repair